Evaluación de los efectos de la digestión química y enzimática sobre las características morfológicas y el ADN de huesos de mamíferos

Abstract

Las colecciones biológicas, inicialmente creadas con fines expositivos, son hoy fuentes valiosas de información para diversas disciplinas. Sin embargo, muchas carecen de protocolos estandarizados para la limpieza de muestras, lo que puede alterar su integridad morfológica o genética. Este estudio evaluó el impacto de dos técnicas comunes de preparación de material osteológico de mamíferos sobre su morfología y ADN. Se aplicaron 16 tratamientos de limpieza (químicos y enzimáticos), que variaron en concentración, temperatura y duración, a miembros posteriores de ratas Wistar (n = 5 por tratamiento). La eficacia de limpieza se evaluó macroscópicamente y con microscopía electrónica, mientras que la calidad del ADN extraído fue analizada por espectrofotometría. Los tratamientos químicos mostraron mayor eficacia en la remoción de tejido blando, aunque aumentaron la porosidad ósea. Los tratamientos enzimáticos preservaron mejor la estructura, pero eliminaron menos tejido. En todos los casos se logró extraer ADN, siendo más abundante en los tratamientos enzimáticos. El tratamiento más eficaz fue KOH 5% durante 2 horas a 70 °C, ya que combinó una buena limpieza, baja porosidad ósea y adecuada calidad del ADN. Se recomienda evaluar a futuro otros métodos y el efecto de estos tratamientos en la conservación ósea y genética a largo plazo.

Biological collections, originally established for exhibition purposes, are now valuable sources of information for multiple disciplines. However, many lack standardized protocols for specimen cleaning, which may alter their morphological and genetic integrity. This study evaluated the impact of two commonly used techniques for the preparation of mammalian osteological material on both morphology and DNA quality. Sixteen cleaning treatments (chemical and enzymatic), varying in concentration, temperature, and duration, were applied to the hind limbs of Wistar rats (n = 5 per treatment). Cleaning efficacy was assessed macroscopically and through scanning electron microscopy, while DNA quality was analyzed by spectrophotometry. Chemical treatments were more effective in removing soft tissue but increased bone porosity. Enzymatic treatments pre-served bone structure better but were less efficient at tissue removal. DNA was successfully extracted from all samples, with higher concentrations generally obtained from enzymatic treatments. The most effective treatment overall was KOH 5% for 2 hours at 70 °C, as it achieved thor-ough cleaning, low bone porosity, and satisfactory DNA quality and purity. Future studies should consider testing additional cleaning methods and assessing the long-term effects of these treatments on both bone integrity and DNA preservation.