Evaluación de las propiedades antimicrobiana, antiparasitaria, diurética y citotóxica de especies medicinales nativas del género Euphorbia : E. serpens Kunth, E. schickendantzii Hieron y E. collina Phil., caracterización de los metabolitos bioactivos

Abstract

El objetivo de esta tesis fue estudiar tres especies vegetales empleadas por la medicina tradicional: Euphorbia serpens, E. schickendantzii y E. collina, para evaluar la presencia de actividad, diurética, antiparasitaria, citotóxica y antimicrobiana, e identificar y aislar el/los principio/s activo/s. Del material vegetal desecado se realizaron extracciones seriadas con solventes de polaridad creciente, hexano, acetato de etilo y metanol, obteniéndose extractos hexánicos, de acetato de etilo y metanólicos respectivamente. Además, a partir del material desecado se obtuvieron extractos hidroalcólicos por maceración y extractos acuosos por infusión. En el Capítulo 1 se evaluó la actividad diurética de E. serpens, debido a su uso como diurética en la medicina tradicional. Utilizando modelos in vivo se ensayaron los extractos hexánico, metanólico y de acetato de etilo de E. serpens, y acuosos e hidroalcólicos de las tres especies vegetales estudiadas. No se encontró actividad diurética, para ninguna de las plantas. En el Capítulo 2 se evaluó la actividad antihelmíntica de las tres especies vegetales, exponiendo larvas de Ancylostoma caninum a extractos hexánicos, de acetato de etilo y metanólicos; y huevos de Haemonchus contortus a extractos hidroalcólicos. Los extractos metanólicos obtenidos de las tres especies tuvieron efecto inhibitorio sobre la motilidad larval. El extracto metanólico de E. collina, además, inhibió la eclosión de huevos. Los ensayos confirmaron el efecto antihelmíntico de E. collina. En el Capítulo 3 se evaluó la actividad citotóxica de las tres especies de Euphorbia utilizando el test de letalidad de Artemia salina, exponiendo larvas a diferentes concentraciones de extractos hexánicos, de acetato de etilo y metanólicos. Todos los extractos mostraron actividad citotóxica al menos en una de las dosis empleadas. El extracto hexánico de E. collina fue el que presentó la mayor actividad. Además, se realizaron ensayos de toxicidad in vivo de extractos metanólico, hidroalcohólico y hexánico de E. collina, los cuales no mostraron toxicidad en ratones. En el Capítulo 4 se evaluó la actividad antimicrobiana de los extractos hexánicos, de acetato de etilo y metanólicos de E. serpens, E. schickendantzii y E. collina,

contra Escherichia coli, Pseudomona aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Fusarium verticillioides, en métodos in vitro. Se determinó que los extractos de acetato de etilo y metanólico de E. collina, y metanólico de E. schickendantzii, tuvieron actividad antimicrobiana. Los extractos hexánico y de acetato de etilo de E. collina crudos, se reunieron y se fraccionaron mediante una cromatografía en columna. De las fracciones obtenidas, una de ellas, denominada G10-11 inhibió el 50 % del crecimiento de Fusarium verticillioides. En el Capítulo 5 se realizó una marcha fitoquímica con extractos etanólicos de E. serpens, E. schickendantzii y E. collina, determinando la presencia de compuestos esteroidales, triterpenos, flavonoides, taninos, fenoles, saponinas, lípidos, proteínas e hidratos de carbono. De la fracción G10-11 se aisló una mezcla de 51 % de cicloartenol y un 49 % de 24-metilenocicloartenol.

The aim of this work was to study three species used by traditional medicine: E. serpens, E. schickendantzii and E. collina, to evaluate the presence of diuretic, antiparasitic, cytotoxic and antimicrobial activity; identify and isolate their active principles. Sequential extractions were carried out on dry plant with solvents of growing polarity, hexane, ethyl acetate and methanol, obtaining hexane, ethyl acetate and methanolic extracts, respectively. Also, hydroalcoholic extracts by maceration and aqueous extracts by infusion from the dry material were obtained. In Chapter 1, the diuretic activity of E. serpens was evaluated due to its use as a diuretic in traditional medicine. Using in vivo models, the hexane, methanlic and ethyl acetate extracts of E. serpens and aqueous and hydroalcoholic extracts of the three species were tested. No diuretic activity was found for any of the plants.

In Chapter 2, the anthelmintic activity of the three plant species was evaluated, exposing Ancylostoma caninum larvae to hexanic, ethyl acetate and methanolic extracts; and Haemonchus contortus eggs to hydroalcoholic extracts. The methanolic extracts obtained from the three species had an inhibitory effect on larval motility. The methanolic extract of E. collina also inhibited the hatching of eggs. The tests confirmed the anthelmintic effect of E. collina. In Chapter 3, the cytotoxic activity of the three Euphorbia species was evaluated using the Artemia salina lethality test, exposing larvae to different concentrations of hexane, ethyl acetate and methanolic extracts. All the extracts showed cytotoxic activity at least in one of the doses used. The hexane extract of E. collina was the one that presented the highest activity. In addition, in vivo toxicity tests of methanolic, hydroalcoholic and hexanic extracts of E. collina were carried out, which did not show toxicity in mice. In Chapter 4, the in vitro antimicrobial activity of the hexane, ethyl acetate and methanolic extracts of E. serpens, E. schickendantzii and E. collina was evaluated against Escherichia coli, Pseudomona aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Fusarium verticillioides. It was determined that the ethyl acetate and methanolic extracts from E. collina, and methanolic extracts from E. schickendantzii, had antimicrobial activity. The crude E. collina hexane and ethyl acetate extracts were combined and fractionated by column chromatography. Of the fractions obtained, one of them, called G10-11, inhibited 50 % of the growth of Fusarium verticillioides. In Chapter 5 a phytochemical screening was carried out with ethanolic extracts of E. serpens, E. schickendantzii and E. collina, determining the presence of steroidal compounds, triterpenes, flavonoids, tannins, phenols, saponins, lipids, proteins

and carbohydrates. In the fraction G10-11, a mixture of 51 % cycloartenol and 49 % 24-methylenecycloartenol was isolated.