Aspectos biológicos y epidemiológicos de amebas de vida libre aisladas en la República Argentina, con énfasis en Acanthamoeba spp

Abstract

Las Amebas de Vida Libre (AVL) son protozoos anfizoicos de amplia distribución en la naturaleza. Cuatro géneros pertenecientes a este grupo han demostrado ser patógenos para el hombre y animales de experimentación: Naegleria, Balamuthia, Acanthamoeba y Sappinia. En particular, a Acanthamoeba se la considera una AVL “ubicuista”, ya que se la ha hallado en todos los ambientes y lugares donde se la ha investigado. El objetivo de esta tesis fue la búsqueda, aislamiento e identificación de AVL aguas. Los sitios de muestreo correspondieron a la Ciudad de Bahía Blanca y a otros sitios geográficos de la Republica Argentina. En Bahía Blanca se analizaron muestras de agua corriente y de tanques de reserva domiciliarios, de aguas recreacionales (piscinas cubiertas) y arroyos. Se tomaron muestras del Rio Sauce Grande en la localidad bonaerense de Sierra de la Ventana. Se muestrearon aguas de consumo y recreación de la Localidad de Sarmiento, provincia del Chubut. Se analizaron muestras de diversas fuentes en distintas provincias de la Republica Argentina. En total se procesaron 274 muestras de aguas de diferentes fuentes y localizaciones. Las muestras fueron clasificadas en aguas tratadas (cloradas u otro tratamiento: tanques, grifos, piscinas, etc) y naturales (de ríos, lagos, canales, arroyos, etc.). Dentro de esta clasificación solo el 30% de las aguas tratadas analizadas fueron positivas para el aislamiento de AVL, mientras que dentro de las aguas naturales se obtuvo un 92,6% de positividad en los cultivos. Del total de estos aislamientos, el 98,7% correspondió al género Acanthamoeba, tanto por clasificación morfológica como por métodos moleculares; mientras que 1,3% restante correspondió a una cepa que denominamos “No A, no N”, sin ubicación genérica determinada y de cuyo análisis ultraestructural se desprendió la existencia de endosimbiontes compatibles con partículas virales. Se analizaron también muestras clínicas procedentes de 4 posibles casos de queratitis amebiana humana, resultando 2 de ellos positivos para AVL, y que correspondieron al género Acanthamoeba. Se investigó la presencia de AVL en líquidos comerciales para lentes de contacto, y en diversas muestras biológicas procedentes de un hospital de Bahía Blanca. En ambos tipos de muestras los aislamientos resultaron negativos. En todas las cepas aisladas se realizaron análisis morfométricos, ultraestructurales y moleculares, tendientes a caracterizar los aislamientos y confirmar su ubicación genérica. Además se realizaron pruebas de resistencia a diferentes desinfectantes. Nuestros resultados refuerzan la adjetivación de “ubicuista” para las AVL del género Acanthamoeba, ya que fueron demostradas en todos la ambientes estudiados. Su amplia distribución, el hallazgo en aguas recreacionales y de consumo y su participación como agentes etiológicos de enfermedad humana, refuerzan la necesidad de implementar medidas de control y prevención, así como su consideración por parte del personal de salud al momento de realizar un diagnostico clínico e instaurar un tratamiento específico.

The free-living amoebae (FLA) are amphizoic protozoa widely distributed in nature. Four genera belonging to this group have proved to be pathogenic to humans and experimental animals: Naegleria, Balamuthia, Acanthamoeba and Sappinia. In particular, Acanthamoeba is considered an FLA "ubiquitous" since it has been found in all environments and places where it has been investigated. The aim of this thesis was the search, isolation and identification of FLA in the waters. Sampling sites were for the city of Bahia Blanca and other geographical sites of Argentina. In Bahia Blanca samples of tap water tanks and household reserves, recreational water (indoor) and streams they were analyzed. Sauce Grande River samples were taken in the locality of Sierra de la Ventana. Drinking water and recreation of the town of Sarmiento, Chubut province were sampled. Samples from different sources in different provinces of Argentina were analyzed. In total 274 samples of water from different sources and locations were processed. The samples were placed in treated water (chlorinated or other treatment tanks, faucets, pools, etc.) and natural (rivers, lakes, canals, streams, etc.). Within this classification, only 30% of treated water tested positive for isolation of FLA, while natural waters within 92.6% positivity in the cultures was obtained. Of all the isolates, 98.7% were Acanthamoeba, both morphological classification by molecular methods; while remaining 1.3% corresponded to a strain called "non-A, non-N" without certain generic location and ultrastructural analysis which came off the existence of endosymbionts compatible with viral particles. Clinical samples from 4 possible human cases of amoebic keratitis were also analyzed, resulting in 2 of them positive for AVL, which corresponded to Acanthamoeba. FLA's presence in commercial liquid for contact lenses, and various biological samples from a hospital in Bahia Blanca was investigated. In both types of samples were negative isolates. Morphometric, ultrastructural and molecular, aimed to characterize the isolates and confirm your generic location analyzes were performed on all isolates. Additionally stress tests were conducted at different disinfectants. Our results reinforce the adjectives of "ubiquitous" for AVL, especially Acanthamoeba, as were demonstrated in all the studied environments. Its wide distribution, the finding in recreational waters and drinkig waters, and their participation as etiologic agents of human disease, reinforcing the need to implement prevention and control measures, as well as consideration by health personnel when making a clinical diagnosis and establish specific treatment.